一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： 1640 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 第一次建议1:2传代，传代情况每两天换液

备注： 使用无菌离心管收集培养基，保存作对比培养。如果对比效果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，待培养状态良好后，灌满完全培养液并密封瓶口以确保细胞运输的最佳效果。在收到细胞时，请用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后再进行后续处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片将作为重要售后依据，如未提供，默认收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

如细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，保留5ml培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养；如细胞密度超过80%，可按以下步骤进行传代：

丢弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），放入37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态；大部分细胞变圆脱落后，迅速回到操作台，轻敲培养瓶，加入5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
按照1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，丢弃培养液，用PBS清洗一次。
加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩并转为圆形后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，再转移到15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，将沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移到冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如果后续需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏：

从液氮中取出细胞管（佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，观察冻存管中无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中部分细胞可能会因贴壁不牢而脱落，这是正常现象。处理方法为：收集所有培养液至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作对比培养，加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，重悬细胞，按1:2比例分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

细胞出现问题，可重发的情况如下：

运输途中遇到的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液），可重发。
细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
常温发货的细胞静置24小时后，干冰运输的细胞复苏后24小时内大部分细胞未存活（需提供真实细胞状态照片），可重发。
若干冰运输的细胞复苏后24小时未存活或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，亦可重发。
细胞活性问题需在收到后7天内提供真实实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
收到细胞当天以及第2、3天时请拍照，若3天内未告知，视为产品合格。
若出现问题时，请提供3天内的照片及细胞操作详细步骤，技术人员判定责任后可重发。

细胞出现问题，不予以重发的情况如下：

客户引起的细胞污染，不重发。
客户操作不当导致细胞状态不佳，不重发。
采用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不佳，不重发。
细胞状态不佳，未提供前3天照片的，不重发。
细胞培养期间经过其他处理的，不重发。
细胞收到2天内未通知的，不重发。
其它情况视具体情况而定。